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                微生物檢測中培養基的質量控制措施

                發布時間: 2021-10-21  點擊次數: 34次
                  微生物檢測中培養基的質量控制措施
                  培養基是液體、半固體或固體形式的,含天然或合成成分,用于保證微生物繁殖或保持其活力的物質。培養基的制備和使用是微生物實驗室檢測工作的重要環節,培養基自身質量的優劣、保存是否得當、配制使用是否正確等都直接影響到檢測結果的準確性。本文對微生物實驗室在培養基購置、貯存、制備、使用等方面應采取的質量控制措施進行討論,談一些觀點和看法。希望有助于微生物檢測工作的同行們更好的開展工作。
                  1、培養基的購置與驗收
                  1.1 購置
                  從培養基自身的質量來看,不同生產廠家的產品,甚至同一廠家不同批號的產品都會存在差異[1]。依據ISO/IEC17025《檢測和校準實驗室能力的通用要求》,對培養基的供應企業進行評價后選擇合格的供應商,這是培養基購買過程中重要的步驟。應選擇產品市場信譽度高、有質量保證能力和服務保證能力的企業;企業是否通過了質量管理體系的認證是較為客觀的評價指標。要求生產企業提供:培養基成分名稱及產品編號、批號、使用前的pH、儲藏信息和有效期、性能評價和所用測試菌株、技術數據清單、質控證書以及必要的安全/危害數據等材料。
                  1.2 驗收
                  購買的培養基到貨后,應有專人做好接受和驗收工作,應仔細核對生產企業提供的資料、培養基名稱、規格數量、外觀特征、批號、保質期是否符合要求。每批培養基到貨物后都應對培養基的質量進行檢測,滿足檢測方法規定的要求后方可投入使用。
                  2、培養基的儲存
                  干粉培養基應保存在陰涼干燥處,要避免陽光直射;未開瓶的培養基在室溫下的最長保存2年,開瓶后的干粉培養基易吸濕,應注意防潮并在6個月內用完。應定期對儲存中的培養基進行常規檢查,如容器密閉性復查、首次開封日期、內容物的感官檢查,如果培養基發生結塊、顏色異常和其他變質跡象就不能再使用。
                  3、培養基的制備
                  3.1 培養基用水
                  培養基制備用水應使用電阻率不小于30萬Ωcm的蒸餾水或與其同質的水,最好不使用離子交換器生產的去離子水。
                  3.2 稱量
                  稱量時要用專用的角匙,避免交叉污染而影響檢驗結果;干粉培養基易吸潮,如有條件,盡量在濕度較低的房間稱取培養基。
                  3.3 復水
                  復水時不得用銅鍋或鐵鍋,以防有離子混入培養基中,影響微生物的生長;容器的大小需大于復水后培養基總體積的2倍以上,避免在加熱溶解過程中,培養基溢出;含有瓊脂粉的培養基,在加熱溶解之前可以浸泡數分鐘;加熱培養基時一定要進行攪拌,特別是瓊脂類培養基。為避免燒焦和沸騰溢出,對于少量的培養基最好使用沸水浴進行加熱。燒糊的培養基營養物質被破壞,并可產生有毒物質,如發現焦化,或未溶解均勻前培養基有溢出,該培養基即不能使用,應重新制備。對于瓊脂類培養基進行再融化時應使用沸水浴或流動蒸汽進行加熱,最多只能加熱兩次,第二次再融化后仍未用完的培養基應棄去。
                  3.4 滅菌
                  一般培養基采用濕熱滅菌,即高壓蒸汽滅菌,通常是121℃ 15 min,含糖或特殊培養基,按照國家標準或生產商提供的說明滅菌。已配制好的培養基必須立即滅菌,避免微生物生長繁殖而消耗養分,改變培養基的酸堿度。高溫可破壞培養基的營養成分,還會使瓊脂的凝膠強度下降,因此必須嚴格控制滅菌溫度和時間,并且不可重復滅菌。高壓蒸汽滅菌鍋的壓力表等要定期進行檢定,并定期采用生物指示菌法或化學變色紙片對滅菌效果進行驗證。
                  3.5 pH測定
                  微生物必須在適宜的pH范圍內才能正常生長繁殖或體現其生物特性。培養基配方要求的pH為滅菌或消毒后的pH 值,即培養基使用前的pH,并應在25℃溫度下采用精密酸度計進行測量,固體瓊脂培養基應以特殊的膠體表面測量電極進行測量。使用過程中,如果需要調整培養基的pH,應用1mol/L Na0H或 lmol/LHCL調整,注意不可反復調pH,否則會影響培養基的滲透壓。
                  3.6 配制好的培養基保存
                  滅菌以后培養基應該迅速冷卻至所需溫度,避免長時間保存在滅菌鍋內,造成過度滅菌,影響培養基的營養成分或選擇性效果。所配制的培養基的量,應該是在最長保存期限內正好使用完。含染料的培養基應閉光保存;倒好的瓊脂平板如果配制的當天未使用完,應于冷藏保存,如果保存時間超過2天,應將其放入密封的塑料袋中保存;配好的肉湯類培養基如果保存時間超過2個星期,應將其放在帶有螺旋蓋的試管或其它密閉的試管或容器中防止蒸發。

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