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                Protein A Magnetic Beads 磁珠

                Protein A Magnetic Beads 磁珠

                簡要描述:Protein A Magnetic Beads 磁珠:免疫沉淀系列

                瀏覽量: 80

                所屬分類:磁珠

                更新日期:2020-07-30

                廠商性質:經銷商

                詳情介紹
                品牌自營品牌規格1ml/5ml
                供貨周期現貨主要用途蛋白免疫沉淀
                應用領域生物產業

                Protein A Magnetic Beads 磁珠

                Protein A磁珠在大小為0.2 um的納米磁珠上共價結合了大量的Protein A蛋白,與傳統的Protein A免疫沉淀瓊脂糖凝膠比較,抗體結合能力相同,背景更低的特點,由于采用磁性分離,使得每次IP和CoIP可以節省40%的時間。

                 

                名稱

                特性

                磁珠大小

                0.2 μm

                磁珠濃度

                10 mg/mL

                IgG 結合量

                0.5 mg/mL

                適用范圍

                IP,CoIP等

                穩定性

                pH 6-8, 4oC長期穩定

                儲存條件

                4oC

                Protein A Magnetic Beads 磁珠儲存條件

                pH 6-8, 4oC長期穩定,禁止產品凍結。

                 

                Protein A Magnetic Beads 磁珠使用說明

                1. 樣品制備

                請根據不同的樣品選擇合適的處理方法:

                樣品

                樣品處理

                 

                血清

                若目標蛋白豐度較高,建議用結合緩沖液稀釋血清樣品至目標蛋白終濃度為10~100   µg/mL,置于冰上備用(或置于-20℃長期保存)。

                 

                 

                懸浮細胞

                離心收集細胞(4oC, 500 g, 10min),棄上清后稱重,按每毫克細胞50µL的比例用1× PBS洗滌 2次;按每毫克細胞5~10 µL的比例加入結合緩沖液,同時加入蛋白酶抑制劑,混勻后置于冰上處理10min;離心收集上清液(4oC, 12000g,10min),置于冰上備用(或置于-20oC長期保存)。

                 

                 

                貼壁細胞

                移去培養基,按每 1.0×105個細胞150 µL的比例用1×PBS洗滌兩次;用細胞刮棒刮脫細胞,收集至1.5 mLEP管內,按每 1.0×105個細胞20~30 µL的比例加入結合緩沖液,同時加入蛋白酶抑制劑,混勻后置于冰上處理10min,離心收集上清液(4oC, 12000g,10min), 置于冰上備用(或置于-20oC長期保存)。

                 

                 

                大腸桿菌

                離心收集大腸桿菌(4oC,12000g,2min),棄上清后稱重,按每克(濕重)菌體10 mL的比例用1×PBS洗滌2次;按每克(濕重)菌體5~10 mL的比例加入結合緩沖液,同時加入蛋白酶抑制劑(如終濃度為1 mM的PMSF),重懸菌體,超聲裂解細胞,離心收集上清(4oC,12000g,10min)。

                2. 磁珠預處理:

                將磁珠充分混勻,取25~50 µL磁珠,400 µL結合緩沖液洗滌3次,棄上清。

                3. 抗體與磁珠結合:

                3.1 抗體稀釋:結合緩沖液稀釋抗體至終濃度為5~50 µg/mL,置于冰上備用。

                3.2 抗體結合:將準備好的400 µL抗體加入準備好的磁珠中,置于翻轉混合儀孵育(常溫30 min,4℃,2 h),后進行磁性分離,收集上清液置于冰上以備后續檢測。

                3.3洗滌(Washing):400 µL結合緩沖液洗滌3次,每次10min。

                *注意:結合過程中,磁珠可能會出現聚團或呈片狀,屬于正?,F象 ,不會影響實驗結果。

                4. 抗原與抗體-磁珠復合物結合

                4.1 加入400 µL步驟1準備的樣品,置于翻轉混合儀(常溫30 min,4℃,2 h)。

                4.2 洗滌(Washing):400 µL結合緩沖液洗滌4次,每次5min。

                4.3 洗脫(Elution):本操作說明書提供以下兩種抗原洗脫方案,操作者可根據后期檢測的需要選擇不同的抗原洗脫方法。

                4.3.1 變性洗脫法:此方法洗脫的樣品適用于SDS-PAGE檢測。分離磁珠,棄上清,向磁珠中加入60 µL 1× SDS-PAGE Loading Buffer混合均勻,100℃加熱10min。分離磁珠,收集上清,進行SDS-PAGE檢測。

                4.3.1非變性洗脫法:此方法洗脫的樣品保持原有的生物活性,可用于后期功能分析。分離磁珠,棄上清,向磁珠中加入25-50 µL洗脫緩沖液,室溫孵育10 min;分離磁珠,收集上清液至新的EP管,并立即加入1 µL中和緩沖液將洗脫產物pH調節至中性,用于后期功能分析。



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